Ko nga raupapa ira tangata o te nuinga o nga wheori kua mohiotia.Ko nga rangahau waikawa nucleic he waahanga poto o te DNA i hangaia hei ranu ki nga waahanga DNA viral, RNA ranei.Ko te tauhohenga mekameka polymerase (PCR) he tikanga pai ake mo te rapu mate.Kua whakawhanakehia nga tikanga tātaritanga teitei i nga wa tata nei.
A. Hangarau whakakotahi waikawa nucleic
Ko te whakakotahitanga o te waikawa nucleic, ko te nuinga ko te blotting ki te Tonga(Te Tonga) me te whakaraerae ki te Raki (Te Taitokerau), he tikanga hou te whakawhanake tere i roto i te mara tātaritanga huaketo.Ko te take o te whakamatautau ranu ko te whakamahi i nga waahanga poto o te DNA (e kiia ana ko te "torotoro") i hangaia hei whakakotahi me nga waahanga DNA viral, RNA ranei.Ma te whakamahana, te maimoatanga kawakore ranei, ka wehea nga whenu-rua i te DNA, i te RNA ranei ki nga whenu kotahi, ka kore e nekehia i runga i te tautoko totoka.Whai muri i tera, ka taapirihia te rangahau me te whakakotahi ki te DNA whaainga, RNA ranei.I te mea kua tapaina te rangahau ki te isotope me te nuclide kore-radioactive, ka kitea te DNA, te RNA ranei e whai ana ma te autoradiography, ma te punaha biotin-avidin ranei.I te mea ko te nuinga o nga momo ira tangata kua whakakaohia, kua raupapahia, ka kitea ma te whakamahi i nga raupapa huaketo-motuhake hei tirotiro i te tauira.I tenei wa, ko nga tikanga whakakotahitanga ko: dot blot , in situ hybridization in cells , DNA blotting(DNA) (Southern blot) and RNA blotting(RNA) (Northern blot).
Hangarau B.PCR
I roto i nga tau tata nei, kua whakawhanakehia he raupapa o nga tikanga whakakaha waikawa karihi in vitro i runga i te PCR, hei whakamatautau i nga wheori tairongo kore ranei.Ko te PCR he tikanga ka taea te whakahiato i te raupapa DNA motuhake ma te tauhohenga polymerase in vitro.Kei roto i te tukanga o te PCR he huringa waiariki o nga hikoinga e toru: denaturation , annealing , me te toronga I te pāmahana teitei (93 ℃ ~ 95 ℃), ka wehea te DNA taurua-rua ki nga whenu DNA kotahi;katahi ka iti te pāmahana (37 ℃~60 ℃), e rua ngā pūmua nucleotide kua whakahiatohia ki ngā wāhanga DNA taapiri;engari i te pāmahana e tika ana mo te Taq enzyme (72 ℃), ka timata te whakahiato o nga mekameka DNA hou mai i te pito tuatahi ma te whakamahi i te DNA taapiri hei tauira me nga nucleotides kotahi hei rauemi.Na i muri i ia huringa, ka taea te whakanui i tetahi mekameka DNA ki nga mekameka e rua.Ma te tukurua i tenei mahi, ka taea te whakamahi i ia mekameka DNA kua whakahiatohia i roto i te huringa kotahi hei tauira mo te huringa e whai ake nei, a ka ruarua te maha o nga mekameka DNA i ia huringa, ko te tikanga ka whakanuia te hanga PCR i roto i te 2n tere rangitaki.I muri i nga huringa 25 ki te 30, ka kitea te hanga PCR na roto i te electrophoresis, ka kitea nga hua DNA motuhake i raro i te rama UV (254nm).Mo tana painga o te motuhake, te tairongo, me te ngawari, kua whakamahia te PCR ki te taatai haumanu mo nga mate huaketo maha penei i te HCV, HIV, CMV, me te HPV.I te mea he tino tairongo te PCR，ka taea te kite i te DNA huaketo i te taumata fg, me ata whakahaere te mahi kia kore ai e pai te pai.Hei taapiri, ko te hua pai o te whakamatautau waikawa karihi ehara i te mea he huaketo hopuhopu ora kei roto i te tauira.
Ma te whakamahi whanui o te tikanga PCR, ka hangaia nga tikanga hou me nga tikanga i runga i te tikanga PCR mo nga kaupapa whakamatautau rereke.Hei tauira, ka taea e te PCR ine i te wa tuturu te kite i te uta viral;Ka whakamahia te PCR in situ ki te tautuhi i te mate huaketo i roto i te kiko, i nga pūtau ranei;Ka taea e te PCR kohanga te whakanui ake i te motuhake o te PCR.I roto i a raatau, kua tere ake te whakawhanaketanga o te PCR ine i te waa tuuturu.He maha nga tikanga hou, penei i te TaqMan hydrolysis probe, hybridization probe, me te molecular beacon probe, kua honoa ki roto i te tikanga PCR ine ine, e whakamahia whanuitia ana i roto i te rangahau haumanu.I tua atu i te tautuhi tika i te uta viral i roto i te wai o te tinana o nga turoro, ka taea hoki te whakamahi i tenei tikanga ki te kite i te mutant whakararu i te tarukino.Na reira, ko te PCR ine i te waa tuuturu ka whakamahia i roto i te aro turuki i nga hua whakaora me te tirotiro i te rongoa.
C. Te kitenga teitei o nga waikawa nucleic viral
Ki te whakatutuki i nga hiahia mo te tātari tere o nga mate hopuhopu hou, kua whakatauhia nga momo tikanga rapunga teitei, penei i nga maramara DNA(DNA).Mo nga maramara DNA, ka whakahiatohia nga rangahau motuhake ka piri ki nga maramara silicon iti i roto i te kiato tiketike rawa hei hanga DNA probe microarray (DNA) ka taea te whakakotahi ki te tauira.Ko te tohu o te whakakotahitanga ka taea te whakaahua ma te miihini confocal mo te matawai taiaho ranei, ka mahia ano e te rorohiko me te nui o nga huinga raraunga e pa ana ki nga momo ira ka taea.E rua nga momo maramara DNA.Ko te "kirikiri synthesis" e whai ake nei: ko nga oligonucleotides motuhake ka whakahiato tika ki runga i nga maramara.Ko tetahi atu ko te maramara poka wai DNA.Ko nga ira kua oti te whakamaarama me nga hua PCR ka taia ki runga i te kiriata.Ko te painga o te hangarau maramara DNA ko te kitenga i te wa kotahi o te nui o nga raupapa DNA.Ko te putanga hou o te maramara kitenga tukumate ka taea te tautuhi neke atu i te 1700 nga wheori tangata i te wa kotahi.I whakatauhia e te hangarau maramara DNA nga raruraru o nga tikanga tuku iho o te waikawa karihi, he tino whanui te whakamahi i roto i te tātaritanga huaketo me te rangahau mate urutomo.
Wā tuku: Tihema-23-2020